质粒DNA共转怎么转染？

适合瞬时基因表达的产品是哪个？

jetPRIME^® 是推荐用于血清存在条件下，贴壁细胞的常规转染试剂。它非常适合DNA的转染、几个质粒的共转、DNA/siRNA的共转，并且对细胞非常温和，因为转染时只需少量的试剂和核酸。

jetPEI^® 转染试剂特别适用于自动或手动高通量筛选（HTS），可提供三种Protocol：反向、批量、正向。jetPEI^® 提供高重复性结果，并且DNA/ jetPEI^®复合物能稳定存在长达4小时。

 

- 如何使用jetPRIME^® 进行多个质粒DNA共转？

对于多个质粒共转，推荐每孔的总DNA用量不超过jetPRIME^® 说明书上指定的大DNA用量。每种质粒的使用比例根据质粒的大小、结构和预期的表达水平而定。每种质粒用量应至少占每孔总DNA用量的10%。

 

- 如何进行质粒DNA和siRNA的共转？质粒DNA和单链寡核苷酸的共转？

对于质粒DNA/siRNA的共转，我们推荐使用jetPRIME^® 试剂。请参阅jetPRIME页面上提供的DNA和siRNA共转的标准protocol：http://www.polyplus-transfection.com/products/jetprime/

对于DNA/ssODN（单链寡核苷酸）的共转，可以应用相同的protocol。

 

- 难转细胞如何进行转染？

一些悬浮细胞和原代细胞比如淋巴细胞、成纤维细胞、神经元，很难用化学试剂进行转染，因此对于这类细胞通常推荐电转或病毒转。

除了用这些方法转染难转细胞，Polyplus-transfection开发了一种基于聚合物的转染试剂jetMESSENGER™ 。它用于mRNA的转染，并在各种难转细胞如淋巴细胞、神经元和多种原代细胞中显示出高转染效率。相比DNA转染，mRNA转染获得更高的转染效率，转染后蛋白表达更快，与质粒或病毒载体的转染相比，无插入突变的风险。

 

- DNA/jetPRIME^® 复合物能稳定存在多长时间？

使用jetPRIME^® 为了获得更好的转染效率，推荐复合物孵育时间不要超过十分钟。因此，对于需要更长孵育时间的高通量筛选应用，推荐使用jetPEI^®，因为jetPEI^®/DNA复合物可稳定存在长达4小时。

 

 

- 使用jetPRIME进行DNA转染，存在质粒大小的限制吗？

使用jetPRIME^® 进行DNA转染，没有质粒大小的限制。但是，请记住对于同样DNA量，大质粒的基因拷贝数低于小质粒。

 

- 使用jetPRIME进行质粒转染的机制是什么？

jetPRIME^®与DNA相互作用形成阳离子复合物，通过内吞作用进入细胞。核内体通过质子海绵机制在细胞质基质中释放出DNA (Behr, Chimia 1997)。质粒大多数在有丝分裂期间，核膜消失时进入细胞核。由于这个原因，原代细胞或细胞分裂慢的细胞系通常很难转染。

更多转染机制的信息，请参考：http://www.polyplus-transfection.com/technologies/what-is-transfection/