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免疫组化SP法实验步骤
人阅读 发布时间：2012-05-08 14:03
SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.
按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等，其中SP法是最常使用的方法。
一般的sp法步骤啊,具体如下：
1、烤片，68℃，20分钟,
2、 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3、阻断 灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS冲洗3X5min；
4、抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃，15－20min)，自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。
5、正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗.
6、滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照)；
滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;
7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;
8、DAB/ H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
上海研卉生物科技有限公司
按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等，其中SP法是最常使用的方法。
一般的sp法步骤啊,具体如下：
1、烤片，68℃，20分钟,
2、 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3、阻断 灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS冲洗3X5min；
4、抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃，15－20min)，自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。
5、正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗.
6、滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照)；
滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;
7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;
8、DAB/ H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
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