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免疫组化实验步骤
人阅读 发布时间：2012-05-08 14:08
1、4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后；
2、加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢)30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3；
3、加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml)30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
4、加入用血清稀释液(牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g)稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3；
5、加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；
6、加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；
7、加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应；
8、梯度酒精脱水之后，封片，拍照。
上海研卉生物科技有限公司
2、加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml＋0.01MKPBS 100ml＋30%过氧化氢)30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3；
3、加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X100＋0.01MKPBS 100ml)30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
4、加入用血清稀释液(牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g)稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3；
5、加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；
6、加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；
7、加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应；
8、梯度酒精脱水之后，封片，拍照。
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